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植物组织培养中污染原因判断及污染苗抢救

作者:组培仪器设备_组培瓶编辑 发布时间:2019-04-09 14:50 浏览次数:

文章来源:www.hxcszlk.com/news/jswd/252.html

返回:技术问答

1、污染原因判断

如果污染菌类是零星分散在培养基中,则可确定是人为引起的污染。如培养基、接种用具灭菌不彻底;接种室长期不灭菌,接种台摆放物品杂乱,菌类太多;超净工作台长期未换滤网,使净化能力降低;工作人员操作不正确,动作生硬缓慢,开瓶时间过长,操作中心在人体范围内。

如果污染菌类是从材料周围长起,则证明是植物材料带菌引起,可能是接种工具灭菌不彻底,接种时材料被污染;或是未及时发现污染苗,接种过程中交叉感染。

如果污染菌类是从培养基以上部分长起,而不是先从培养基长起,且发生在5 d以后,则说明是材料自带的内生菌。

如果污染菌类是从培养基以下开始长菌,发生时间较早,且有从里向外发展的趋势,则说明是切口引起的污染,原因是灭菌后未剪去2个切口或虽剪切口但器具带菌。

组培

2、污染苗抢救

细菌被污染后,由于细菌繁殖靠芽孢,细菌不会弥散整个空间,因此只要及时发现,将材料上部未感菌部分去除转接,材料仍然可以用;但若真菌被污染,则必须经高温、高压灭菌后扔掉,即使仅形成菌丝,因为菌丝能到达材料内部,真菌污染是灭绝性的。

用抗生素等杀菌剂处理,虽有不少报道,但至今未发现有抗生素能对各种菌都有效,并且常会影响植物材料的正常生长分化。有的另一些药剂虽杀菌效果好,但往往容易引起盐害,无法利用。

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对已污染的培养物,有时因植物材料难得或重新发生要花费很多时间,也可切取较大植株重新消毒接种。分别用400万、600万单位/L青霉素无菌水溶液浸泡银白杨组织培养细菌污染苗40 min以上,可有效防治组织培养中的细菌污染。处理过的苗继代培养时,不再重复出现细菌污染现象,且苗分化能力强,生根培养时根系发达,移栽成活率高。研究证明,如果继代培养中只有真菌污染,采用3%多菌灵无菌液浸泡0.5 h以上即可,用无菌水冲洗后接种或不用无菌水冲洗直接接种都可消除真菌污染。如果在细菌污染和细菌、真菌同时污染的情况下,可采用 HgCl2消毒法把污染培养苗切割成较长茎段作外植体,用自来水冲洗 0.5 h,再在超净工作台上用乙醇和HgCl2进行短时间处理,即可再度建立无菌苗培养体系。

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